HPLC-zuiverheid: wat betekent 98% of 99%?

HPLC is hogedrukvloeistofchromatografie. Het monster wordt onder hoge druk door een kolom gepompt die gevuld is met heel fijne deeltjes. Stoffen die sterker aan dat materiaal hechten, komen later uit de kolom dan stoffen die zwakker hechten. Zo worden het peptide en verwante stoffen van elkaar gescheiden.

Bij peptiden gebruikt men meestal reversed-phase HPLC, met een UV-detector die meet bij een golflengte waarop de peptidebinding licht absorbeert (rond 210–220 nm).

Het resultaat is een chromatogram: een grafiek met de tijd op de horizontale as en het signaal van de detector op de verticale as. Elke stof geeft een piek. De grootste piek hoort bij het peptide; kleinere pieken ernaast zijn onzuiverheden.

De zuiverheid is het oppervlak van de hoofdpiek gedeeld door het oppervlak van alle pieken samen. Bij 99% komt 1% van het gemeten signaal van andere stoffen.

Deze stoffen lijken sterk op het peptide zelf, daarom is een goede scheiding belangrijk. Hoe peptiden worden gemaakt, lees je in Wat zijn peptiden?.

• Ketens waarin een aminozuur ontbreekt of dubbel zit, ontstaan bij de synthese.
• Ketens waarvan een beschermgroep niet volledig is verwijderd.
• Afbraakproducten, zoals geoxideerde of gedeamideerde vormen.

• Welke stof het is: daarvoor is een massameting (MS) nodig. Een zuivere stof kan de verkeerde stof zijn.
• Hoeveel peptide er in de flacon zit: zuiverheid is een verhouding, geen hoeveelheid.
• Hoeveel water en tegenion (zoals acetaat of TFA) er in het poeder zit: die tellen niet mee in het zuiverheidspercentage.

Het verschil tussen 98% en 99% is één procentpunt aan verwante stoffen. Belangrijker dan het precieze getal is dat de zuiverheid per lot is gemeten, dat het certificaat ook een massameting bevat en dat het lotnummer overeenkomt met je flacon. Een rond getal zonder chromatogram, lot of laboratorium zegt minder dan een exact getal uit een controleerbaar rapport.

De certificaten van BrabantLabs staan op Labresultaten, met de gemeten zuiverheid per lot. Hoe je een volledig rapport leest, inclusief MS en gemeten inhoud, staat in Een labrapport lezen. Bekijk bijvoorbeeld de certificaten bij BPC-157.

Wat betekent HPLC?

Hogedrukvloeistofchromatografie: een scheidingstechniek waarmee een lab meet welk deel van het signaal van het peptide komt en welk deel van verwante stoffen.

Is 99% zuiverheid hetzelfde als 99% peptide in de flacon?

Nee. Zuiverheid is de verhouding tussen de pieken in het chromatogram. Een poeder bevat daarnaast water en tegenionen, die niet in dat percentage meetellen.

Waarom is naast HPLC ook MS nodig?

HPLC laat zien hoe zuiver een stof is, MS welke stof het is. Samen bevestigen ze zuiverheid en identiteit.

Welke zuiverheid is gebruikelijk voor een onderzoekspeptide?

Veel leveranciers noemen 98% of hoger. Kijk vooral of de meting per lot is gedaan en of je het rapport kunt controleren.

• Bekijk BPC-157 in de shop